凝膠過(guò)濾色譜,又稱凝膠滲透色譜。 一般來(lái)說(shuō),在生物化學(xué)界中常用的名稱是凝膠過(guò)濾色譜(GFC),在高分子化學(xué)界中常用的名稱是凝膠滲透色譜(簡(jiǎn)稱 GPC)。
TOSOH 公司始建于 1935 年,原名東洋曹達(dá)工業(yè)株式會(huì)社(TOYO SODA),其產(chǎn)品優(yōu)異的產(chǎn)品性能,在生物制藥,生物技術(shù)等領(lǐng)域享有盛譽(yù)。
TSK 凝膠柱廣泛應(yīng)用于制藥和生物工程中蛋白質(zhì),多肽,多糖,寡糖,DNA,RNA 等生物高聚物的分離,純化或分子量的測(cè)定。
TSK-GEL SW 系列色譜柱的填料以剛性的球型硅膠為基質(zhì),在其表面通過(guò)共價(jià)鍵化學(xué)鍵合親水基團(tuán)而成。其 pH 適用范圍為 2.5-7.5,可以使用與水完全互溶的有機(jī)溶劑,如乙腈、丙酮、甲醇或乙醇等。適合分析分離蛋白質(zhì)和多肽類(lèi)樣品。
TSK-GEL SW 系列色譜柱的選擇指南
未知分子量的樣品
TSKgel G3000SWXL是理想的摸索條件的色譜柱。
如果感興趣的蛋白質(zhì)的洗脫接近排除體積,下一步應(yīng)該嘗試使用G4000SWXL。相反,如果感興趣的
蛋白質(zhì)洗脫接近色譜末端,嘗試使用G2000SWXL。
蛋白質(zhì)(一般情況)
通過(guò)校正曲線或者評(píng)估蛋白質(zhì)的分子量選擇恰當(dāng)?shù)目壮叽?,繼而可以選擇出 TSK-GEL SWxl 系列色譜
柱中的一款使用。
單克隆抗體
TSKgel G3000SWXL通常用于質(zhì)量控制。
樣品量有限或者低濃度時(shí),可以使用 TSK gel SuperSW 3000。
多肽
TSKgel G2000SWXL是多肽分析的首選。
樣品量有限或者低濃度時(shí),可以使用 TSK gel SuperSW 2000。
注意事項(xiàng)
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安裝說(shuō)明
*流向*
安裝使用時(shí)注意色譜柱上標(biāo)明的流向箭頭,安裝反了會(huì)降低色譜柱柱效。
*去處氣泡*
從儀器上安裝和拆卸色譜柱時(shí)一定要注意不要讓氣泡進(jìn)入,安裝時(shí)要去除管路中的氣泡。
*安裝*
當(dāng)進(jìn)樣端螺母擰下,有溶劑從接口溢出,可將色譜柱小心的與儀器連接,這樣做可以保證沒(méi)有氣泡進(jìn)入柱
子.如果沒(méi)有黨課從接處流出,將柱子反接,用低于 0.5ml/min 的低流速走柱,趕走氣體。確定當(dāng)脫氣的
溶劑從色譜柱進(jìn)樣口流出后,按流向箭頭所示接柱。
*正確使用*
柱子安裝完成后,進(jìn)行工作時(shí)要注意避免高壓力和大流速,同時(shí)壓力的快速變化也要避免。
保存說(shuō)明
*日常使用*
如果柱子每天都使用,不需要將它從儀器上取下,流動(dòng)相可在柱子中保留過(guò)夜。
*短期保存*
將色譜柱從儀器上取下,封緊保護(hù)螺帽。保存 4-30 溫度度,不得低于 4 度。
*長(zhǎng)期保存*
用水溶液或含 0.05%的疊氮化鈉緩沖液保存。保存溫度 4-30 度,不得低于 4 度。不能受陽(yáng)光直射。
溶劑
*替換溶劑*
色譜柱中原廠保存的溶劑是 0.1M 的磷酸緩沖液含 0.05%的疊氮化鈉和 0.1M 的硫酸鈉。若流動(dòng)相要改變,
可用低于 0.5ml/min 的流速走柱。若要用有機(jī)溶劑替換,先用蒸餾水過(guò)渡,再用有機(jī)溶劑走柱,注意濃度
梯度,有機(jī)溶劑濃度的快速變化會(huì)使柱效降低。
*PH 范圍*
SW 系列色譜柱的溶劑 PH 范圍在 2.5-7.5。
*溶劑范圍*
SW 系列所用的溶劑除了水溶液和緩沖液,還可以使用親水性的有機(jī)溶劑,包括甲醇,乙腈以及它們的水
溶液。
*清洗溶液*
PH 較低(如: PH 3.0),濃度較高的鹽溶液(如:0.5M Na2SO4);
添加水溶性有機(jī)物(MeOH,ACN,EtOH,10%-20%)的極性緩沖液;
SDS(0.1%),尿素(8M)或胍(6M)的緩沖溶液。注意:這些試劑很難被去除。它們需要使用 20-40 個(gè)柱體積
的 20%ACN 進(jìn)行沖洗。因此,只有當(dāng)先前的清洗方法無(wú)效時(shí)才選擇使用本方法。
流速
*推薦流速*
SW 色譜柱的推薦流速在 0.5-1.0ml/min,最大流速是 1.2 ml/min,柱子流速不能超過(guò)最大流速。?