第136期? 抗體純化利器--東曹Ca++Pure-HA羥基磷灰石層析介質(zhì)
Ca++Pure-HA是一種由鈣和磷酸鹽組成的、用于分離生物分子的羥基磷灰石[Ca10(PO4)6(OH)2] 層析介質(zhì)。Ca++Pure-HA顆粒，包括配基和填料骨架，都是由同一種材料來源同時(shí)形成，為工藝開發(fā)提供了無與倫比的選擇性和分辨率。其高選擇性可以分離電泳或其他層析模式難以分離的蛋白。
雖然Ca++Pure-HA的選擇性和多相互作用模式顯示了廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域，但它最適合用于生物分子分離相關(guān)的應(yīng)用。Ca++Pure-HA尤其適用于純化單克隆和多克隆抗體，分離抗體的多種亞型、同工酶，純化抗體片段，以及從雙鏈DNA中分離單鏈DNA。
? ? ? ?Ca++Pure-HA層析介質(zhì)是大孔徑的球型羥基磷灰石六方晶體結(jié)構(gòu)（圖1）。經(jīng)過高溫?zé)Y(jié)，提高了機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)穩(wěn)定性，能夠滿足工業(yè)規(guī)模的應(yīng)用要求。Ca++Pure-HA的強(qiáng)大特性使其可在高流速和大型層析柱中重復(fù)循環(huán)使用。
圖1 Ca++Pure-HA的晶體結(jié)構(gòu)
產(chǎn)品參數(shù)
骨架 | 羥基磷灰石 Ca10(PO4)6(OH)2 |
平均粒徑 | 39μm |
動(dòng)態(tài)吸附載量 | ＞30g/L 人源化IgG（2min柱留時(shí)間） |
＞25g/L 溶菌酶（2min柱留時(shí)間） | |
壓力范圍 | 10 MPa（max） |
珠密度 | ≥0.5g/ml |
耐堿性 | ＞65CIP cycle in ? 1.0mol/L NaOH |
出貨狀態(tài) | 干粉 |
pH 范圍 | 6.5-14.0 |
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工作原理
與鈣基團(tuán)的相互作用
※ 位于表面的鈣基團(tuán)帶正電荷
※ Ca++Pure-HA 鈣基團(tuán)的工作原理類似于陰離子交換
與磷酸基團(tuán)的相互作用
※? Ca++Pure-HA的磷酸基團(tuán)帶負(fù)電荷
※? 與磺酸基和羧基等陽離子交換介質(zhì)一樣，Ca++Pure-HA的磷酸基團(tuán)通過與帶正電荷的氨基殘基通過靜電相互作用結(jié)合強(qiáng)堿性物質(zhì)
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應(yīng)用
圖2 Ca++Pure-HA的動(dòng)態(tài)吸附載量
如圖2所示，Ca++Pure-HA具有很高的動(dòng)態(tài)吸附載量（DBC）。在5%的穿透率下，駐留時(shí)間為4分鐘時(shí)，對人IgG的DBC大于40g/L。
圖3使用 Ca++Pure-HA精純IgG樣品（來自Protein A純化后收集的組分）
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Ca++Pure-HA使用氯化物等洗脫緩沖溶液可有效去除mAb中的聚集體和降解物，如圖3所示。分析結(jié)果顯示單體峰和聚集體峰之間具有較高分辨率。
圖 4 使用Ca++Pure-HA純化前后IgG樣品的SEC分析
圖4顯示的是在Ca++Pure-HA上純化前后的SEC分析譜圖，聚集體和降解物明顯減少。HPLC分析的數(shù)據(jù)匯總?cè)绫?/span>1所示。
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條件 | 填料 | 樣品組分（ml） | 聚集體（%） | 片段（%） |
初始進(jìn)樣量 | 18.8 | 1.3 | ||
KCl溶液洗脫 | Ca++Pure-HA | 8.9 | 1.1 | 1.0 |
表1 使用Ca++Pure-HA及KCl洗脫緩沖溶液減少的IgG聚集體和片段
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? ? ? ? ?Ca++Pure-HA在0.5mol/L NaOH中具有良好的耐堿性，即使超過65個(gè)CIP循環(huán)后，其動(dòng)態(tài)吸附載量也沒有明顯降低（圖5）。圖中為使用1.0 mol/L NaOH，每經(jīng)過5個(gè)CIP循環(huán)后測得的溶菌酶的動(dòng)態(tài)吸附載量。
圖5 Ca++Pure-HA的耐堿性
Ca++Pure-HA層析介質(zhì)具有卓越的分離特性以及無與倫比的選擇性和分辨率，可以在捕獲階段到最終精純的任何步驟中靈活應(yīng)用，為純化工作者在分離生物分子時(shí)提供了更好的選擇。
訂貨信息
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貨號 | 產(chǎn)品描述 |
45045 | Ca++Pure-HA，50g |
45039 | Ca++Pure-HA，100g |
45040 | Ca++Pure-HA，250g |
45041 | Ca++Pure-HA，500g |
45042 | Ca++Pure-HA，1kg |
45043 | Ca++Pure-HA，5kg |
