Ca++Pure-HA是一種由鈣和磷酸鹽組成的、用于分離生物分子的羥基磷灰石[Ca₁₀(PO₄)₆(OH)₂]?層析介質(zhì)。Ca++Pure-HA顆粒，包括配基和填料骨架，都是由同一種材料來源同時形成，為工藝開發(fā)提供了無與倫比的選擇性和分辨率。其高選擇性可以分離電泳或其他層析模式難以分離的蛋白。

? ? 羥基磷灰石（HA）是目前最具有特征的混合模式填料之一，在整個生物分離領(lǐng)域，具有重要的研究和工業(yè)應(yīng)用價值。該填料兼具離子交換和金屬親和力，具有其他填料不具備的特殊分離能力，能夠為生物分離領(lǐng)域的新興挑戰(zhàn)提供獨特的解決方案。 Ca++Pure-HA尤其適用于純化單克隆和多克隆抗體，分離抗體的多種亞型、同工酶，純化抗體片段，以及從雙鏈DNA中分離單鏈DNA。

Ca++Pure-HA層析介質(zhì)是大孔徑的球型羥基磷灰石六方晶體結(jié)構(gòu)（圖1）。經(jīng)過高溫?zé)Y(jié)，提高了機械強度和化學(xué)穩(wěn)定性，能夠滿足工業(yè)規(guī)模的應(yīng)用要求。Ca++Pure-HA的強大特性使其可在高流速和大型層析柱中重復(fù)循環(huán)使用。

圖1 Ca++Pure-HA的晶體結(jié)構(gòu)

圖2 ?Ca++Pure-HA 顆粒顯微鏡照片

產(chǎn)品參數(shù)

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工作原理

1.?與鈣基團的相互作用

※?位于表面的鈣基團帶正電荷

※?Ca++Pure-HA 鈣基團的工作原理類似于陰離子交換

2.?與磷酸基團的相互作用

※?Ca++Pure-HA的磷酸基團帶負(fù)電荷

※?與磺酸基和羧基等陽離子交換介質(zhì)一樣，Ca++Pure-HA的磷酸基團通過與帶正電荷的氨基殘基通過靜電相互作用結(jié)合強堿性物質(zhì)

3.?與羥基的相互作用

※?羥基具有形成氫鍵的能力，但是這一途徑尚未被證明對生物分子的保留有顯著的貢獻(xiàn)。羥基的含量遠(yuǎn)低于磷酸基，因此即使參與氫鍵，也可能比磷酸氧介導(dǎo)的氫鍵貢獻(xiàn)更少的結(jié)合能力。

4.?混合模式相互作用

※?混合模式同時也解釋了 Ca++Pure-HA 如何在離子交換作用無法提供的條件下，依然能夠發(fā)揮卓越的結(jié)合能力。大多數(shù)抗體會結(jié)合陽離子交換填料，但需要在低 pH 值和低電導(dǎo)率的條件下進(jìn)行結(jié)合。Ca++Pure-HA 在中性pH值下具有良好的載量，有時甚至是在生理電導(dǎo)率下也具有良好的載量。這是 Ca++Pure-HA表面化學(xué)物質(zhì)之間協(xié)同作用的一個很好例證。金屬親和作用克服了陽離子交換的弱點，而且兩種弱相互作用共同產(chǎn)生了足夠的結(jié)合能，非常具有實用價值。

圖3?Ca++Pure-HA的動態(tài)吸附載量

? ? 如圖3所示，Ca++Pure-HA具有很高的動態(tài)吸附載量（DBC）。在5%的穿透率下，駐留時間為4分鐘時，對人IgG的DBC大于40g/L。

圖4?使用?Ca++Pure-HA精純IgG樣品（來自Protein A純化后收集的組分）

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Ca++Pure-HA使用氯化物等洗脫緩沖溶液可有效去除mAb中的聚集體和降解物，如圖4所示。分析結(jié)果顯示單體峰和聚集體峰之間具有較高分辨率。

圖?5?使用Ca++Pure-HA純化前后IgG樣品的SEC分析

圖5顯示的是在Ca++Pure-HA上純化前后的SEC分析譜圖，聚集體和降解物明顯減少。HPLC分析的數(shù)據(jù)匯總?cè)绫?/span>1所示。

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表1 使用Ca++Pure-HA及KCl洗脫緩沖溶液減少的IgG聚集體和片段

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Ca++Pure-HA在0.5mol/L NaOH中具有良好的耐堿性，即使超過65個CIP循環(huán)后，其動態(tài)吸附載量也沒有明顯降低（圖6）。圖中為使用1.0 mol/L NaOH，每經(jīng)過5個CIP循環(huán)后測得的溶菌酶的動態(tài)吸附載量。

圖6?Ca++Pure-HA的耐堿性

Ca++Pure-HA層析介質(zhì)具有卓越的分離特性以及無與倫比的選擇性和分辨率，可以在捕獲階段到最終精純的任何步驟中靈活應(yīng)用，為純化工作者在分離生物分子時提供了更好的選擇。

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