※?TSKgel SW型尺寸排阻色譜柱
一、SWXL 系列色譜柱初次使用注意事項
1. 流動相現(xiàn)配現(xiàn)用,配好后使用0.45μm的水相濾膜過了后再超聲脫氣。
2. 樣品一定要完全溶解后,再使用0.45μm的針式濾頭過濾后再進樣。
3. G2000SWXL/G3000SWXL/G4000SWXL 的耐受壓力是7.0MPa,所以要在儀器上設(shè)定限壓保護7.0MPa。
4. 初次拿到柱子后,參照柱盒中的Inspection data的方法評估柱效后再使用。
5. 柱子一定要常溫保存。不能放在冰箱冷藏。
6. 當柱子峰形變寬了或者是壓力升高了,就需要清洗柱子了。
7. 對于使用尿素或者含SDS的流動相的柱子,最好專柱專用,表面活性劑對柱床有不可逆的改性作用。
8. 最好使用保護柱,這樣可以有效延長分析柱的使用壽命。
二、色譜柱的清洗步驟
隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加,出現(xiàn)柱效下降無法達到分離要求,或伴有峰型拖尾、分叉等情況時,就需要清洗色譜柱。建議清洗過程中將色譜柱與檢測器斷開連接,防止流通池污染。
1.?反向連接色譜,并以最大流速的1/2運行色譜柱 。
2.??使用5倍柱體積 (CV) 的pH3.0 0.5 mol/LNa2SO4水溶液沖洗色譜柱。
3.?使用5 CV Milli-Q或去離子水沖洗色譜柱。
4.?使用5 CV 20%乙腈清洗色譜柱。
5.?使用5 CV Milli-Q或去離子水沖洗色譜柱。
6.?再正向連接色譜柱,并以樣品分析時的流速使用至少10 CV的流動相來平衡色譜柱。
★?請注意:應逐漸提高流速,以免損壞色譜柱。
三、色譜柱的保存
? 短期保存(2-3天后還要使用)
在使用的流動相條件下,擰好堵頭后,常溫保存。
? 長期保存(超過3天以上不用)
1.?用0.1 mol/L Na2SO4+0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液+0.05% NaN3保存(官方推薦)。
2.?如果不能使用NaN3,請用適當?shù)牧鲃酉嗷蛩畞肀4嫔V柱,建議頻繁用新配置的溶液替換色譜柱內(nèi)的溶劑。
3.?用0.1 mol/L Na2SO4+0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液+0.1% Proclin200保存。
4.??不要使用含有機溶劑的溶液保存色譜柱。
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※?TSKgel PW型尺寸排阻色譜柱
一、PWXL 系列色譜柱初次使用注意事項
1. 流動相現(xiàn)配現(xiàn)用,配好后使用0.45μm的水相濾膜過了后再超聲脫氣。
2. 樣品一定要完全溶解后,再使用0.45μm的針式濾頭過濾后再進樣。
3. G2500PWXL/G3000PWXL的耐受壓力是4.0MPa,G4000PWXL /G5000PWXL/G6000PWXL的耐受壓力是2.0MPa,所以要在儀器上設(shè)定限壓保護。
4. 初次拿到柱子后,參照柱盒中的Inspection data的方法評估柱效后再使用。
5. 柱子一定要常溫保存。不能放在冰箱冷藏。
6. 當柱子峰形變寬了或者是壓力升高了,就需要清洗柱子了。
7. 對于使用尿素或者含SDS的流動相的柱子,最好專柱專用,表面活性劑對柱床有不可逆的改性作用。
8. 最好使用保護柱,這樣可以有效延長分析柱的使用壽命。
二、色譜柱的清洗步驟
1、去除離子性雜質(zhì):對于陽離子性吸附物質(zhì),可以通過提高鹽濃度進行過柱清洗。
2、去除疏水性雜質(zhì):對于疏水性吸附物質(zhì),可以通過提高有機溶劑的濃度進行過柱清洗。
3、去除難溶性蛋白質(zhì):使用含尿素的溶液清洗。
請根據(jù)樣品性質(zhì),從方法1和2中選擇適當?shù)那逑捶椒?。如果色譜柱性能仍不能恢復,可考慮采用方法3。但需注意尿素可能會殘留在色譜柱上。
★請注意:應逐漸提高流速,以免損壞色譜柱。
三、色譜柱的保存
1、短期保存(2-3天后還要使用)
如果數(shù)天內(nèi)不會使用色譜柱,請從設(shè)備上取下色譜柱。如果溶劑中不含任何腐蝕性的離子,請使用保護塞封住色譜柱的末端。如果溶劑中含有腐蝕性離子,如鹵素,請在保存之前,使用純水清洗色譜柱。
2、長期保存(超過3天以上不用)
如果長時間不使用色譜柱,請使用純水替換溶劑。然后請從設(shè)備上取下色譜柱,并使用保護塞封住色譜柱的末端。長期保存(例如,超過 3 個月)時,請使用含有 0.05 %疊氮化鈉的水溶液保存。
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※?TSKgel 蛋白分離用色譜柱
TSKgel親水性聚合物基質(zhì)的蛋白分離用色譜柱,包括SuperQ-5PW,?DEAE-5PW,SP-5PW,CM-5PW,DEAE-NPR,SP-NPR,BioAssist Q/S這幾個型號的離子交換色譜柱,還有疏水、親和等其他多種類型的柱子。
一、色譜柱的清洗
1.?先使用0.1~0.2 mol/L氫氧化鈉水溶液或20~40%的醋酸水溶液進樣清洗?(100 μL,3~5針) 即可沖掉色譜柱上吸附的雜質(zhì)。
2.?使用20%~40%乙酸清洗水溶液進樣清洗?(100 μL,3~5針) 即可沖掉色譜柱上吸附的雜質(zhì)。
如果采用該方法清洗后,色譜柱性能仍無法恢復,再考慮以下兩種方法。
3.?去除疏水性雜質(zhì):在清洗液中添加10-20 %的甲醇、乙腈等有機溶劑后過柱清洗。
4.?去除難溶性蛋白:在清洗液中添加6-8 mol/L的尿素或0.2-0.3 %的中性表面活性劑 (Triton、Tween等) 后過柱清洗。但需注意尿素及界面活性劑可能在柱中殘留。
二、色譜柱的保存
1.?請在色譜柱中注入保存溶液并擰緊保護塞后室溫保存,防止填料干燥。
2.?保存溶液:參考出廠檢測報告。
3.?色譜柱進口或出口干燥、或者洗脫溶液的鹽析,會導致色譜柱堵塞。如果將色譜柱保存在 0℃以下,溶劑可能會凝固,導致色譜柱性能降低。