什么是 HILIC？

親水作用液相色譜(HILIC)是分離多種類(lèi)型極性化合物和親水性化合物最有效的色譜技術(shù)。簡(jiǎn)單的講，HILIC 是正相色譜分離的一種，但其使用反相中常使用的流動(dòng)相。 一般而言，HILIC 的洗脫順序與 RPLC相反，保留隨著分析物的帶電性和親水性增加而增強(qiáng)。這保證了 RPLC 色譜柱上無(wú)保留化合物的直接分離。

HILIC 是一款具有親水固定相的色譜柱?？梢允褂盟?，緩沖液和高比例與水混溶的有機(jī)相作為流動(dòng)相。典型的 HILIC 應(yīng)用可以使用有機(jī)溶劑占 50-95%的緩沖液體系，緩沖鹽應(yīng)該在有機(jī)溶劑中具有很高的溶解性，如醋酸銨的乙腈溶液。

極性化合物和親水化合物類(lèi)型

HILIC 色譜柱可以分離極性化合物和親水性化合物。ZIC-HILIC 提供的選擇性適用于分離很多種類(lèi)的分子如：帶有親水性或帶電性的官能團(tuán)。如糖類(lèi)、代謝物、酸性和堿性化合物、有機(jī)或無(wú)機(jī)離子、金屬?gòu)?fù)合物、氨基酸、肽、蛋白質(zhì)片段、植物或細(xì)胞提取物等等。

這些物質(zhì)通常來(lái)講具有很小或負(fù)的 LogP 值，在反相柱上保留很弱。ZIC-HILIC 色譜柱就是分離極性和親水性物質(zhì)的色譜柱,其選擇性與反相色譜柱具有正交性。?

HILIC 色譜柱的分離機(jī)理

目前，HILIC 色譜柱是通過(guò)進(jìn)樣分析溶質(zhì)在流動(dòng)相和 HILIC 固定相親水表面的水層分區(qū)而進(jìn)行保留。分析物親水性越強(qiáng)，分區(qū)平衡越易轉(zhuǎn)向固定相固定的水層，因此分析物的保留也越強(qiáng)

盡管人們已經(jīng)確認(rèn)了固定相處于有機(jī)溶劑和水混合條件下，親水表面可以固定水層，但是 HILIC 分區(qū)理論也僅僅是依靠間接的證據(jù)。有很多研究者也認(rèn)為這是復(fù)合的分離機(jī)理，包括氫鍵作用和偶級(jí)－偶級(jí)作用等，可能都起到重要的分離作用。有機(jī)溶劑的類(lèi)型及濃度，緩沖鹽的類(lèi)型及濃度，,以及 PH 變化都可以影響分析物的保留。